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第一章 绪论 1

（三）冰箱 10

（六）显微镜 10

（五）水质纯化装置 10

（四）清洗装置 10

（一）原代培养 100

（二）细胞系的演化 100

（三）连续细胞系 101

三、生长曲线 101

四、分化 102

主要参考文献 104

第十一章 组织培养方法的发展 105

主要参考文献 107

一、大规模细胞体外培养系统的基本要求 109

（一）新型培养系统的设备 109

第十二章 动物细胞的大规模离体培养技术 109

三、实验室应用的器具 11

（一）组织培养中常用的金属器具 11

（八）酸度计 11

（十）其他 11

（九）真空泵 11

（七）离心机 11

（三）培养液的选择 110

（二）细胞株（系）的选择 110

（四）细胞生长状况的监测 110

二、几种大规模细胞培养系统 111

（一）气升式深层培养系统 111

（三）微囊培养系统 112

（二）微载体培养系统 112

（四）大载体培养系统 113

（五）中空纤维培养系统 115

（二）干扰素 118

（三）单克隆抗体 118

（一）疫苗 118

三、大规模细胞培养技术的应用 118

主要参考文献 119

（四）基因重组产品 119

（二）玻璃器皿和塑料器皿 12

一、生长晕的测量 120

第十三章 细胞生长指标的测定 120

三、细胞计数 121

二、有丝分裂指数的计算 121

四、生长周期的检测 122

五、细胞周期 123

主要参考文献 124

六、细胞DNA的测定 124

第十四章 显微缩时电影 125

一、连续灌注培养小室 125

二、倒置相差显微镜和保温装置 125

三、显微缩时电影仪 125

四、拍摄步骤 126

主要参考文献 127

（一）离心洗脱法 128

一、各期细胞的分离 128

第十五章 细胞同步化 128

（二）细胞分类拣选法 129

（三）梯度沉降法 129

（二）异亮氨酸饥饿法 130

二、G1/S期细胞的分离 130

（一）血清饥饿法 130

（一）震摇脱落法 131

三、M期细胞的分离 131

（四）胸腺嘧啶核苷阻断法 131

（三）精氨酸饥饿法 131

（五）其他 131

（三）秋水仙素阻抑法 132

主要参考文献 132

（二）胰蛋白酶分离法 132

一、化学诱变剂 133

第十六章 突变型细胞 133

二、CHO突变型细胞系列 134

三、HeLa突变型细胞系列 138

（三）辅助工具类 14

主要参考文献 140

（一）活细胞观察 141

（二）固定染色观察培养细胞 141

第十七章 细胞系的鉴定及其特征（一） 141

一、形态学 141

二、染色体 142

（一）染色体数目和核型分析 143

（二）染色体分带技术 145

三、同工酶谱系 147

（一）同工酶酶谱检测 147

主要参考文献 15

（二）同工酶酶谱在细胞培养中的应用 151

主要参考文献 154

（一）软琼脂细胞群落形成法的基本步骤 155

第十八章 细胞系的鉴定及其特征（二） 155

一、软琼脂细胞群落形成法 155

（二）软琼脂法的应用 156

二、细胞特异表达功能的检测 157

三、细胞DNA遗传特征的检测 158

主要参考文献 159

一、纯净水的制备 16

第三章 清洗、包装、消毒 16

第十九章 基因转染技术 160

一、方法 160

（一）磷酸钙沉淀法 160

（二）DEAE-dextran法 164

（三）原生质体融合法 164

（四）仙台病毒被膜重建法 167

二、应用 169

（一）玻璃器皿类的清洗和包装 17

二、清洗和包装 17

主要参考文献 170

一、玻璃毛细管的制备 171

第二十章 组织培养细胞的显微注射法 171

二、培养细胞 172

三、注射样品 172

四、显微注射 172

主要参考文献 173

一、细胞、组织样品的制备 174

（一）盖玻片和载玻片的预处理 174

第二十一章 原位杂交技术 174

（二）固定 175

（三）标本的制作 176

二、探针的制备和标记 176

（一）探针的制备 176

（二）探针的标记 177

三、杂交反应 182

（一）杂交前的预处理步骤 183

（三）杂交反应后去除非专一性结合 184

（二）杂交反应步骤 184

四、杂交结果的检测 185

（一）放射自显影术 185

（二）生物索标记探针的追踪和检测 186

主要参考文献 189

（二）螺旋盖的清洗和包装 19

（四）橡皮管的清洗 19

（五）砂芯玻璃过滤器的清洗 19

（三）橡皮帽和橡皮塞的清洗 19

（六）去污剂的选择 19

第二十二章 放射自显影术 190

一、基本原理——径迹形成原理 190

二、放射自显影术的分辨率和效率 190

三、标记物 190

四、培养细胞标本的制备 192

五、光学显微镜自显影 193

六、放射自显影术在组织培养中的应用 194

主要参考文献 194

一、仪器的工作原理 196

第二十三章 荧光激活细胞分选仪的简介及其应用 196

二、数据资料的表达形式 198

三、使用仪器的要点 199

（一）蒸气消毒 20

三、消毒 20

四、仪器的用途 200

主要参考文献 203

第二十四章 B淋巴细胞杂交瘤技术和单克隆抗体 204

一、杂交瘤技术的原理 204

二、人源单克隆抗体 205

（一）抗原致敏的B淋巴细胞的来源 206

（二）细胞融合 207

主要参考文献 209

第二十五章 器官培养的方法 210

一、一般原则 211

（二）营养和气体的保证 212

二、培养液 212

（一）细胞迁移的抑制 212

三、气相的组成 214

（二）在液-液界面上的支持培养 215

（一）悬浮培养 215

四、不和气相接触的培养 215

（一）没有支持物的漂浮法 216

五、在气液界面上的培养 216

（五）旋转管培养法 216

（四）与赛璐玢接触的移植物 216

（三）放置在琼脂凝胶中的培养 216

（二）飘浮的“救生圈” 217

（三）硬平板或格栅培养法 217

（一）血浆凝块培养法 218

六、在固体基质上的培养法 218

（二）琼脂凝胶培养法 219

七、循环融合系统 219

（二）干燥高温消毒 22

九、器官组建 220

八、器官灌注系统 220

十、其他一些专门的方法 221

（一）卡氏瓶法和试管法 221

（二）表玻璃培养法 221

（三）滤纸虹吸法 221

十一、关于技术的一些讨论 222

（一）胚胎器官的培养 222

（二）成年器官的培养 222

（三）培养物的体积 222

主要参考文献 223

一、环境影响 224

第二十六章 器官培养物的分化与发育 224

二、团块影响 225

三、不同组织间的相互作用 225

四、肿瘤细胞的相互作用和分化 226

五、病毒、致癌剂和分化 226

六、诱导物和肿瘤的再分化 227

主要参考文献 228

第二十七章 器官培养物的癌变 229

一、化学致癌 229

（三）过滤消毒 23

二、病毒致癌 231

主要参考文献 231

一、淋巴样分化 232

第二十八章 器官培养物的免疫学现象 232

三、继发性免疫反应和持续产生抗体 233

二、原发性免疫反应的诱导 233

四、化疗药物对器官培养物的毒性 234

主要参考文献 236

第二十九章 人体胚胎和肿瘤器官培养 237

一、胚胎的器官培养法 238

二、体外胚胎器官的异源性嵌合 238

（一）鸡和小鼠器官的异源性嵌合 238

（二）哺乳类动物肿瘤与鸡胚的异源性嵌合 238

（二）隔以卵黄膜或透析膜的人瘤中肾上器官培养法 239

（一）在中肾上的人瘤器官培养法 239

三、人瘤的器官培养法 239

（三）以酵母渗析物为基质的人瘤器官培养法 240

（四）以鸡胚中肾和杨氏鸡肝的渗析物为基质的人瘤器官培养法 240

四、体外人瘤器官的重建 241

五、人瘤的短期器官培养 241

主要参考文献 242

第三十章 器官培养在生物学研究上的应用 243

一、形态发生的研究 243

（一）肢芽的形态发生 243

（二）胸骨的形态发生 243

二、腺体发育分化的研究 246

（一）乳腺发育及维持分泌功能的激素依赖 246

（二）唾液腺的分化 247

（四）胰腺的发育分化 248

（五）脑垂体的发育分化 248

（三）甲状腺的分化 248

三、生殖腺的培养 251

四、骨骼和软骨的器官培养 252

五、神经组织的器官培养 255

主要参考文献 257

第三十一章 器官培养在医学研究上的应用 258

一、肿瘤细胞重聚体和浸润行为的研究 258

二、诱导物与肿瘤分化的关系 259

（一）胚胎诱导物方面 259

（二）培养液的作用 260

三、器官培养在癌变发生上的应用 261

（一）乳腺 261

（二）前列腺 262

（三）肺和气管 263

（四）唾液腺 264

（五）卵巢 264

（六）肠道 264

（七）皮肤 265

（八）肾和膀胱 265

四、器官培养物在肿瘤治疗上的应用 266

主要参考文献 268

（四）其他消毒方法 27

主要参考文献 27

（一）培养液的组成成分 28

第四章 培养液的组成和制备 28

一、培养液的基本成分 28

二、平衡盐溶液 30

（三）培养液水质 30

（二）培养液的物理性质 30

（一）血浆 32

三、培养液中天然成分 32

（二）血清 34

（三）胚胎浸出液 35

四、人工合成培养液 36

（一）人工合成培养液的发展 36

五、培养液的配制 41

（一）HCO-3，CO2和HEPES浓度的关系 41

（二）几种常用人工合成培养液的组成成分及其含量 41

（二）基本配制法 42

六、培养液的选择 43

七、抗生素的选择和应用 44

主要参考文献 45

第五章 无血清培养液 46

一、无血清培养液的补充成分及其作用 47

（一）可取代血清的补充成分 47

（二）促进有丝分裂因子 47

（三）贴壁和铺展因子 50

二、建立成细胞系和细胞珠的无血清培养 51

（一）基础培养液的选择 58

（二）不同哺乳类细胞的低蛋白和无血清培养液的配方 58

三、无血清培养的实际操作问题 58

主要参考文献 59

四、最适培养液选择步骤的设计 59

第二章 实验室及实验室装备 6

一、实验室 6

（一）装备室 6

第六章 污染及污染检测 61

一、细胞微生物污染的类型 61

二、微生物污染的检测 61

三、细菌和真菌 62

四、支原体 63

（一）支原体的检测 64

（二）污染支原体的处理 65

五、病毒 66

主要参考文献 67

六、细胞间的交叉污染 67

第七章 组织培养方法的选择 68

一、悬滴培养法 68

（一）单盖玻片悬滴培养法 69

（二）培养室 7

（三）恒温暖房 7

（二）双盖玻片悬滴培养法 70

二、培养瓶培养方法 70

三、旋转管培养法 73

四、灌注小室培养法 74

五、各种培养方法的交替使用和改良 76

主要参考文献 76

第八章 原代细胞培养 77

一、解离组织 77

（一）剖取小鼠胚胎 77

（二）剖取鸡胚 78

（三）解取胚胎组织或器官原基 78

（四）人体活检（或手术）材料 78

（五）成体动物组织的剖取 79

二、解离释放细胞 79

（一）胰蛋白酶解离细胞法 79

二、实验室设备 8

（四）其他实验室 8

（二）胶原酶解离细胞法 81

（三）机械解离细胞法 82

（四）螯合剂解离细胞法 82

（一）外植块培养 83

三、细胞原代培养 83

（三）悬浮细胞培养 84

（二）单层细胞培养 84

（四）细胞培养中应注意的要点 85

主要参考文献 86

第九章 细胞系与细胞克隆 87

一、再培养 87

（一）提示需要更换新的培养液的因素 87

（二）再培养的确定 87

（三）再培养的方法 88

三、细胞克隆 89

二、细胞系的建立 89

（一）培养箱或恒温箱 9

（二）消毒器 9

（一）细胞克隆技术 90

（二）影响群落形成效率的因素 92

（三）克隆的分离 95

主要参考文献 97

第十章 培养细胞的生物学 98

一、培养物 98

二、细胞系 99

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