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生物技术制药教学实验室规则 1

第一章 基因工程制药上游实验 2

实验一 细菌质粒DNA提取和琼脂糖凝胶电泳检测 2

实验二 DNA限制性内切酶酶切分析 4

实验三 PCR扩增目的基因及鉴定 6

实验四 载体DNA与目的基因片段的连接 8

实验五 大肠埃希菌感受态细胞制备、转化和重组子的筛选 10

实验六 目的基因在大肠埃希菌中的表达及鉴定 12

第二章 基因工程制药下游实验 16

实验一 发酵液的预处理和固液分离 16

实验二 免疫球蛋白粗品的制备及含量测定 17

实验三 离子交换柱色谱法分离混合氨基酸 19

实验四 凝胶过滤色谱纯化溶菌酶 21

实验五 膜分离实验 23

实验六 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）测定蛋白质的相对分子质量 27

第三章 细胞工程制药实验 32

实验一 细胞培养用液的配制和无菌处理 32

实验二 动物细胞原代培养 34

实验三 细胞的传代培养 36

实验四 动物细胞冻存与复苏 38

第四章 抗体工程制药实验 41

实验一 单克隆抗体制备过程中饲养细胞的制备 41

实验二 单克隆抗体制备过程中免疫小鼠脾细胞悬液的制备 42

实验三 单克隆抗体制备过程中的细胞融合与培养 43

实验四 单克隆抗体的大量制备 45

第五章 酶工程制药实验 46

实验一 大肠埃希菌发酵制备L-天冬氨酸酶 46

实验二 固定化大肠埃希菌生产L-天冬氨酸 49

第六章 发酵工程制药实验 52

实验一 赖氨酸发酵控制及其产物分析测定 52

实验二 四环素发酵代谢曲线绘制 55

实验三 液相体积氧传递系数KLa的测定 60

实验四 发酵液中四环素的提取与精制 62

第七章 蛋白质药物的化学修饰实验 65

实验一 聚乙二醇修饰溶菌酶 65

实验二 低分子肝素修饰超氧化物歧化酶 66

第八章 综合实验 69

实验一 利用大肠埃希菌制备重组人表皮生长因子 69

实验二 利用毕赤酵母制备重组乙型肝炎疫苗 75

实验三 利用杂交瘤细胞技术制备人血红蛋白单克隆抗体 80

实验四 微生物转化法制备甾体化合物及实验条件的正交优化 85

实验五 离子交换法提取链霉素 91

第九章 设计性实验 95

实验一 重组蛋白类药物的表达、纯化及鉴定 95

实验二 生物制药中试放大研究 100

附录 103

附录一 生物技术制药常用培养基的配制 103

附录二 生物技术制药常用溶液的配制 105

参考文献 111

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