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目录 1

实验须知 1

生物化学实验基本操作训练 3

第一部分　常用生物化学与分子生物学技术及原理 6

第1章　分光光度法 6

1.1 基本原理 6

1.2　分光光度法的定性和定量分析 7

1.3　分光光度计的结构 9

第2章　层析技术 12

2.1　离子交换色谱法 12

2.2　凝胶过滤色谱法 16

2.3　吸附层析法 25

2.4　分配色谱法 27

2.5　亲和层析法 29

第3章　电泳技术 32

3.1　基本原理 32

3.2　一般技术 38

3.3　聚丙烯酰胺凝胶电泳法 41

3.4　蛋白质的凝胶聚焦电泳法 51

第4章　离心技术 59

4.1 基本原理 59

4.2　离心机和转子的种类 63

4.3　离心分离的种类 66

第5章　分子生物学基本原理 69

5.1 基本概念 69

5.2　重组DNA技术 71

第6章　生化实验常用仪器 85

6.1　722型分光光度计 85

6.2　精密pH计 86

6.3　高速离心机 87

6.4　PCR基因扩增仪 87

第二部分　生物化学与分子生物学实验 90

第7章　蛋白质定性定量分析 90

实验一　蛋白质的沉淀反应 90

1．蛋白质的盐析 90

2．用重金属盐沉淀蛋白质 92

3．用沉淀生物碱的试剂沉淀蛋白质 92

6．加热沉淀蛋白质 93

5．用有机酸沉淀蛋白质 93

4．用无机酸沉淀蛋白质 93

实验二　蛋白质的两性反应及等电点测定 94

1．蛋白质的两性反应 94

2．酪蛋白的等电点的测定 96

实验三　Bradford法测定蛋白浓度 96

实验四　血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定 97

实验五　微量凯氏定氮法测定血清总蛋白 99

实验六　蛋白质定量的紫外分光光度法 103

实验七　福林-酚试剂法测定血清总蛋白 103

实验八　用离子交换层析法分离混合氨基酸 105

实验九　凝胶过滤分离高铁血红蛋白与高铁氰化钾 109

实验十　凝胶过滤分离纯化脲酶及其活性测定 111

实验十一　血清γ球蛋白的分离与纯化 115

实验十二　醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 118

实验十三　聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 121

实验十四　凝胶等电聚焦分离血清蛋白质 125

第8章　核酸定性定量分析 127

实验十五　酵母RNA的提取（浓盐法）及成分鉴定 127

实验十六　核酸的定量测定——定磷法 129

第9章　酶学实验 132

1．酶活力 132

2．初速度 132

实验十七　底物浓度及抑制剂对酶促反应速度的影响 133

实验十八　温度、pH对酶促反应速度的影响 137

实验十九　蔗糖酶与淀粉酶的专一性实验 139

实验二十　乳酸脱氢酶及其辅酶的作用实验 140

实验二十一　乳酸脱氢酶同工酶活性测定 143

实验二十二　丙酮酸脱氢酶活性测定 144

实验二十三　糖原合成酶活性测定 145

第10章　代谢实验 147

实验二十四　还原糖的定量测定 147

1．Somogyl-shaffer-Hartmann法定糖 147

2．比色法定糖 150

实验二十五　肝糖原的提取和鉴定 151

1．肝糖原提取 151

2．鉴定 152

实验二十六　粗脂肪的定量测定——索氏提取法 152

1．脂肪皂化值的测定 154

实验二十七　脂肪皂化值及碘值的测定 154

2．脂肪碘值的测定 156

实验二十八　脂肪酸的β-氧化 158

实验二十九　肝组织的生酮作用 160

实验三十　转氨基作用及其鉴定 161

第11章　分子生物学实验 164

实验三十一　外周血白细胞DNA提取（微量法） 164

实验三十二　琼脂糖凝胶电泳 165

实验三十三　大肠埃希菌质粒转化实验 167

实验三十四　微量快速质粒DNA的提取与纯化（碱裂解法） 168

实验三十五　限制性核酸内切酶消化DNA 170

实验三十六　从琼脂糖凝胶中回收DNA片段（低熔点胶法） 172

实验三十七　质粒的柱层析纯化 174

实验三十八　聚合酶链反应 175

实验三十九　单链构象多态性分析 178

1．10％聚丙烯酸胺凝胶的制备 179

2．电泳 179

3．银染 180

4．凝胶干燥 180

第12章　临床生化实验 181

实验四十　酶法（GOD-PAP法）测血清葡萄糖 181

实验四十一　血清尿素氮的测定 182

实验四十二　血清甘油三酯测定 184

实验四十三　红细胞膜的制备 186

实验四十四　红细胞膜蛋白质含量测定（改良福林-酚试剂法） 188

实验四十五　红细胞膜总胆固醇含量的测定 189

实验四十六　维生素C含量的测定（碘滴定法） 191

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