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医药分子生物学实验目的与要求 1

医药分子生物学实验学生守则 2

上编 基础部分 3

第1章 实验室安全防护知识 3

1.1化学试剂安全防护知识 3

有毒化学试剂 3

腐蚀性化学试剂 3

易燃易爆化学试剂 4

强氧化性化学试剂 4

放射性化学试剂 5

1.2辐射防护知识 5

基本概念 5

辐射防护的基本要求 6

辐射防护的基本方法 6

放射性同位素的实验室使用基本要求 7

1.3生物安全知识 7

生物安全的含义 7

微生物危险度评估 8

实验室生物安全分级 9

安全操作规程和管理制度 11

1.4用电安全及其他安全知识 12

安全用电 12

使用高压容器的安全防护 12

思考题 12

第2章 分子生物学实验室标准及功能分区 13

2.1生物学约束 13

2.2物理学约束 13

2.3标准实验室组成 13

思考题 14

第3章 分子生物学实验室常规仪器设备 15

3.1紫外分光光度计 15

相关术语 15

分光光度计的基本结构 15

分光光度法的测量误差 16

测量条件选择 16

紫外分光光度法在分子生物学中的应用 16

3.2离心机 17

离心分离方法 17

离心机分类 18

离心机配件——转子的选用 19

离心管的选用 19

3.3制水系统 20

纯水和超纯水的定义 20

国家标准实验用水 20

水的纯化方法 21

超纯水的制备 22

3.4 PCR仪 22

PCR技术原理 22

PCR仪工作原理 23

3.5凝胶成像系统 23

3.6酶标仪 24

3.7微量移液器 26

微量移液器的一般使用步骤 27

微量移液使用注意事项 28

3.8 pH计 28

PB-20酸度计的使用方法 29

酸度计使用注意事项 29

3.9生物安全柜 30

3.10超净工作台 30

3.11凝胶电泳系统 31

电泳分类 31

电泳仪的分类 32

电泳槽的分类 32

电泳仪的一般使用方法及注意事项 33

3.12高压蒸汽灭菌器 33

3.13液氮罐的使用 34

思考题 34

第4章 实验基本技能与实验室常规基础知识 35

4.1常用器材的清洗处理 35

常用器材的清洗 35

常用洗涤液 36

4.2实验用品及实验环境的消毒灭菌 37

物理方法 37

化学方法 39

实验环境与其他污染物的消毒 40

4.3细菌接种技术 41

接种器具 41

液体接种法 41

平板接种法 41

斜面接种法 42

穿刺接种法 42

4.4细菌培养基本技术 42

细菌培养概述 42

常用细菌培养基 43

菌种的保存与复苏 44

4.5细胞培养基本技术 44

细胞培养的环境 45

细胞培养的基本方法 46

细胞计数及活力测定 46

细胞的冻存及复苏 47

体外培养细胞的分型 47

培养细胞生命期 48

体外培养细胞的种类和命名 48

4.6实验材料的采集与处理 49

血液样品 49

细胞样品 50

组织样品 50

尿液样品 51

4.7试剂及样品的保存 51

试剂的保存 51

核酸的保存 53

酶的保存 53

4.8溶液的混匀 54

4.9实验室污染控制 54

化学污染控制 54

生物污染控制 55

放射性污染控制 55

锐器处理 56

思考题 56

下编 学生实验部分 57

第5章 核酸分离纯化 57

原理概述 57

实验一 真核生物基因组DNA制备 59

方案一 快速制备组织基因组DNA 60

方案二 全血基因组DNA提取 62

实验二 琼脂糖凝胶电泳 65

实验三 总RNA的提取和电泳 70

方案一 经典法（异硫氰酸胍-酸酚法） 70

方案二 Trizol法 72

实验四 RT-PCR 75

一、逆转录（RT） 75

二、PCR 76

实验五 琼脂糖凝胶回收DNA片段 83

思考题 84

第6章 基因克隆 85

6.1分子克隆策略 85

原理概述 85

实验六 体外重组：目的基因与载体的连接 91

实验七 感受态细胞的制备及转化 93

6.2重组体阳性克隆的筛选与鉴定 95

原理概述 95

实验八 重组质粒转化大肠杆菌的初步筛选 98

实验九 质粒的小量制备 100

实验十 限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 103

实验十一 重组子的原位杂交 106

实验十二Southern印迹 108

思考题 111

第7章 基因表达 112

7.1表达系统的选择 112

原理概述 112

实验十三 重组质粒在原核生物中的诱导表达 115

7.2表达检测鉴定与蛋白纯化 117

原理概述 117

实验十四 蛋白质样品制备 119

实验十五 蛋白质的定量 121

实验十六SDS-PAGE蛋白质电泳 124

实验十七 Western Blotting 129

实验十八 免疫沉淀法检测表达蛋白 132

实验十九 免疫荧光抗体法检测表达蛋白 134

实验二十 免疫组化 136

实验二十一 Ni2+柱亲和层析分离纯化带（His）6标签的重组蛋白 139

思考题 141

附录 142

附录1核酸及蛋白质数据 142

附录2分子克隆中常用缓冲液与试剂的配制 145

附录3常用储存液的配制 152

附录4细菌培养基与抗生素 156

附录5常用酶的配制 158

附录6溴化乙锭（EB）的净化和处理 160

附录7常用试剂的作用原理 162

附录8常用试剂与仪器供应商清单 165

主要参考文献 166

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