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第一章 干细胞概述 1

一、干细胞的定义与特性 1

二、干细胞的分类 1

三、干细胞的研究历史及热点 2

参考文献 5

第二章 干细胞培养技术概述 7

第一节 概述 7

一、细胞培养的优势 7

二、细胞培养的限制 7

三、细胞培养的应用 8

四、细胞培养的基本条件 8

五、细胞培养的无菌原则 9

六、细胞实验的注意事项 10

七、细胞培养液的成分及配制 11

第二节 干细胞常用培养方法 13

一、细胞培养方式 13

二、原代取材 14

三、传代培养 16

第三节 干细胞的冻存与复苏 17

一、细胞的冻存 17

二、细胞复苏的过程 19

第四节 细胞污染的检测与鉴定 19

一、细胞污染 19

二、细胞污染的预防 22

第五节 干细胞鉴定方法 23

一、细胞形态观察 23

二、核型分析 24

三、免疫组织化学／荧光染色 25

四、分子水平分析 27

五、流式细胞分析 31

六、细胞亚群分析 32

七、绘制细胞增殖曲线 33

八、细胞凋亡检测 34

第六节 细胞的保存与运输 35

一、细胞保存原则 36

二、细胞运输原则 36

参考文献 36

第三章 胚胎干细胞 37

第一节 概述 37

第二节 小鼠胚胎干细胞 38

一、小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养及饲养层细胞的制备 38

二、小鼠胚胎干细胞建系 40

三、小鼠胚胎干细胞传代、冻存及复苏 42

四、小鼠胚胎干细胞的鉴定 44

第三节 人胚胎干细胞 50

一、人胚胎干细胞的分离及建系 50

二、人胚胎干细胞传代、冻存及复苏 52

三、人胚胎干细胞的鉴定 53

第四节 非人灵长类胚胎干细胞分离及建系方法 54

一、引言 54

二、饲养层细胞的制备 55

三、猴胚胎干细胞的分离及建系 55

四、猴胚胎干细胞传代、冻存及复苏 57

五、猴胚胎干细胞的鉴定 59

参考文献 59

第四章 诱导性多能干细胞 60

第一节 概述 60

第二节 小鼠诱导性多能干细胞 61

一、小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养及饲养层的制备 61

二、反转录病毒的制备及感染 61

三、小鼠诱导性多能干细胞诱导及建系 63

四、小鼠诱导性多能干细胞的传代、冻存和复苏 64

五、小鼠诱导性多能干细胞的鉴定 65

第三节 人诱导性多能干细胞系 65

一、引言 65

二、反转录病毒制备 65

三、供体细胞的取材 66

四、人诱导性多能干细胞诱导 67

五、人诱导性多能干细胞传代、冻存及复苏 69

六、人诱导性多能干细胞的鉴定 69

参考文献 70

第五章 神经干细胞 71

第一节 概述 71

一、神经干细胞的来源和特性 71

二、神经干细胞的应用 72

第二节 神经干细胞的分离、纯化及建系培养 72

一、分离室管膜下区 72

二、神经干细胞的分离和纯化 74

三、流式染色 75

四、流式分析及收集 75

五、神经干细胞建系培养 76

第三节 小鼠胚胎干细胞向神经干细胞的定向诱导分化及神经干细胞的定向分化 76

一、小鼠胚胎干细胞向神经干细胞的定向诱导分化 76

二、小鼠神经干细胞的定向分化 78

第四节 人胚胎干细胞分化成神经前体细胞和多巴胺能神经元 79

第五节 神经元的电生理检测过程 83

第六节 小鼠成纤维细胞向神经干细胞的定向转分化 84

参考文献 85

第六章 造血干细胞 87

第一节 造血干细胞的概述 87

第二节 造血干细胞分离和扩增 88

一、引言 88

二、重要概念与基本方法 89

三、单个核细胞的分离 89

四、CD34+细胞分选 90

五、CD34+细胞的扩增 91

六、造血干细胞冻存和复苏 92

第三节 造血干细胞的鉴定 92

一、流式细胞仪检测CD34+细胞比率 93

二、集落形成单位鉴定 94

三、长期培养检测法（LTC-IC） 95

参考文献 96

第七章 间充质干细胞 98

第一节 概述 98

一、引言 98

二、间充质干细胞的来源和鉴定 98

三、间充质干细胞的特性 99

四、间充质干细胞的研究进展和临床应用 100

第二节 骨髓间充质干细胞 100

一、骨髓间充质干细胞的原代取材 100

二、骨髓间充质干细胞的传代、冻存和复苏 102

第三节 人脐带间充质干细胞 103

一、脐带间充质干细胞的原代取材 104

二、脐带间充质干细胞的传代、冻存和复苏 105

第四节 脂肪间充质干细胞 105

一、脂肪间充质干细胞的原代取材 105

二、脂肪间充质干细胞的传代、冻存和复苏 106

第五节 间充质干细胞的鉴定 106

一、形态观察 106

二、CD分子的检测 107

三、体外分化及鉴定 108

参考文献 112

第八章 精原干细胞 114

第一节 概述 114

第二节 小鼠精原干细胞分离培养 114

第三节 小鼠精原干细胞的鉴定与移植 116

一、小鼠精原干细胞免疫荧光鉴定 117

二、小鼠精原干细胞移植 117

参考文献 120

第九章 干细胞实验室的建设 121

一、基础设施建设 121

二、细胞培养的洁净间 121

三、仪器设备 123

四、《药品生产质量管理规范》 127

参考文献 127

附录 128

附录一 缩略语 128

附录二 溶液的配制 130

一、细胞培养相关溶液的配制 130

二、动物实验相关溶液的配制 138

三、胚胎操作相关溶液的配制 138

四、免疫组织化学染色和流式分选相关溶液的配制 140

五、分子生物学实验相关溶液的配制 142

六、分离神经干细胞的相关溶液的配制 143

附录三 引物 145

附录四 试剂 147

附录五 耗材 153

附录六 仪器 155

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